Juan Diego Flórez va néixer a Lima, Perú, el 1973. Des de molt jove va començar a cantar i a interpretar música popular i folklòrica peruana. Als 17 anys va ingressar al Conservatori Nacional de Música de Lima i, tres anys més tard, va obtenir una beca per continuar els seus estudis de cant al Curtis Institute of Music de Filadèlfia.
El 1996 va debutar professionalment al Rossini Opera Festival de Pesaro, substituint amb molt poc temps d’antelació el tenor protagonista en el paper de Corradino a Matilde di Shabran. L’èxit d’aquesta actuació el va portar aquell mateix any a debutar al Teatro alla Scala de Milà amb Armide de Gluck, sota la direcció de Riccardo Muti, en la inauguració de temporada. Aquests primers compromisos van marcar l’inici d’una carrera internacional que l’ha dut als principals teatres d’òpera del món.
Des d’aleshores ha actuat al Metropolitan Opera de Nova York, la Royal Opera House de Londres, l’Òpera Estatal de Viena, l’Opéra National de Paris i el Teatro alla Scala, entre molts altres. Ha col·laborat amb destacats directors d’orquestra i d’escena i és convidat habitual de festivals internacionals.
Al llarg de la seva trajectòria ha interpretat nombrosos papers del repertori de bel canto, especialment en òperes de Rossini, Bellini i Donizetti. En els darrers anys ha ampliat el repertori amb personatges de l’òpera romàntica francesa, com Roméo et Juliette o Faust de Gounod, i Werther o Manon de Massenet, així com alguns rols de Verdi i Puccini.
Paral·lelament, manté un fort compromís amb l’educació musical i la inclusió social. El 2011 va fundar Sinfonía por el Perú, un projecte que ofereix a infants i joves, especialment de comunitats vulnerables, accés a educació musical de qualitat mitjançant orquestres, cors i diversos conjunts.
Debutà al Gran Teatre del Liceu la temporada 1999/2000 amb el Concert Extraordinari Orquestra Simfònica i Cor del Gran Teatre del Liceu, dirigit per Riccardo Muti, i hi ha tornat en diverses ocasions, la darrera amb West Side Story (2024/25).