Nascut a Pavia, Ambrogio Maestri va estudiar Piano i Veu amb Umberto Grilli. La seva carrera internacional va començar el 2001 quan va debutar com a Falstaff a La Scala de Milà i al Teatro Verdi de Busseto sota la direcció de Riccardo Muti i Giorgio Strehler.
Al Teatro alla Scala, els seus compromisos inclouen els papers principals de Don Pasquale i Gianni Schicchi, Jago a Otello, Dulcamara a L'elisir d'amore, Renato a Un ballo in maschera, Don Carlo di Vargas a La forza del destino i Giorgio Germont a La traviata. També ha actuat al Metropolitan Opera, l'Òpera de París, l'Òpera Estatal de Viena, l'Òpera Estatal de Baviera i la Deutsche Oper de Berlín. Els seus papers inclouen el Comte de Luna a Il trovatore, Amonasro a Aida, els papers principals de Simon Boccanegra, Rigoletto, Nabucco, Don Pasquale, Tonio i Alfio a Cavalleria Rusticana i Pagliacci, Gérard a Andrea Chénier, Dulcamara a L'elisir d'amore i Mamma Agata a Viva La Mamma.
Els compromisos d'Ambrogio per la temporada 2023/24 inclouen Don Pasquale i Il trittico a l'Òpera Estatal de Viena, Tosca a Tòquio i Nagoya, Adriana Lecouvreur a l'Òpera de París i al Gran Teatre del Liceu, L’elisir d’amore a l'Òpera Estatal de Baviera i de nou Don Pasquale a Milà. Debutà al Gran Teatre del Liceu amb Aida la temporada 2007/08, i hi ha tornat amb Falstaff (2010/11), L’elisir d’amore (2012/13), Tosca (2013/14), Nabucco (2015/16) i Il tabarro i Gianni Schicchi (2022/23).